- Гальванический / векторный режим работы с частотой 20 кГц;
- Моментальная фотопертурбация;
- Алгоритм автокалибровки;
- Быстрое многозонное / точечное лазерное воздействие.
Методы локализованного лазерного воздействия такие как восстановление флуоресценции после фотообесцвечивания (FRAP, FLIP), фотоактивация, uncaging, фотоабляция, представляют собой очень мощные инструменты для фотоманипуляции тканями или анализа внутриклеточной динамики белков и других макромолекулярных комплексов. Например, FRAP допускает возмущение устойчивого распределения флуоресценции с помощью фотообесцвечивающей флуоресценции в избранных областях. После этапа отбеливания исследователи могут наблюдать и анализировать, как распределение флуоресценции возвращается к тому же или другому устойчивому состоянию, давая оценку пространственно-временному периоду полураспада интересующей молекулы в одном конкретном месте живого образца. Фотоактивация или фотопреобразование использует фотоконвертируемые флуорофоры, позволяющие проводить морфологические эксперименты типа «pulse and chase».
Система освещения iLas 2 предоставляет легкий в использовании интерфейс для управления лазерами, настройкой области интереса ROI и планирование эксперимента. Чтобы упростить процесс визуализации и повысить скорость вращения лазерного луча, система освещения iLas2 управляется собственной электроникой. Векторный режим сканирования и режим реального времени предоставляют возможность измерить быстрые процессы. Пользователь может фотообесцвечивать быстро движущиеся структуры, проанализировать их восстановление и отследить как они продолжают двигаться с помощью алгоритма слежения.
Рис. 8. Экспрессирующие клетки HeLA (клатриновая цепь mRFP-LCa). Изображения были получены в TIRF освещении (экспозиция 100 мс). Клатрин накапливается на плазматической мембране в покрытых клатрином ямах. Несколько одноточечных областей интереса ROI были обесцвечены сразу, чтобы включить несколько количественных определений. Двухшаговая последовательность после фотообесцвечивания была получена для того, чтобы получить компромисс между хорошей точностью на t1 /2 и слабо наблюдаемым фотообесцвечиванием (4 кадра в секунду, затем 0,25 кадра в секунду).
Рис. 9. 2D+t и 3D+ t FRAP широкополосные последовательности визуализации и связанные с ними кривые перераспределения. Во всех случаях весь Golgiapparatus (объем интереса) был подвержен лазерному облучению. А) GFP-димеклин (2D+t, кривая 1), B) GFP-Rab6A (3D+t, кривая 3) и C) PA-GFPRab6A (3D+t, кривая 2). Все кривые восстановления показывают среднюю интенсивность в течение времени в объеме аппарата Гольджи.