Результатом сотрудничества компании CoolLED с Университетом Стратклайда стал светодиодный осветитель pE-340fura, который представляет собой сделанный на заказ осветитель для радиометрической визуализации кальция с помощью кальциевого индикатора Fura-2. Система освещения изготовлена на основе успешной платформы светодиодных осветителей серии pE-300, а также может применяться для ежедневной флуоресцентной микроскопии.
Особенности
- Выделенные полосы возбуждения 340 нм и 380 нм для радиометрической кальциевой визуализации Fura-2;
- Широкий белый свет (435-645 нм) для визуализации стандартных флуорофоров;
- Микросекундное переключение (340/380 нм) для визуализации высокоскоростных событий;
- Стабильное светодиодное освещение минимизирует уровень шума ниже экспериментального, снижая количество ложных срабатываний и повышая точность измерений;
- Более высокое отношение сигнал-шум обеспечивает более чистые изображения и данные, при этом требуется меньше красителя Fura-2, что снижает токсичность и затраты на проведение эксперимента;
- Оптимизированная ультрафиолетовая оптика обеспечивает максимальную освещенность в стандартных конфигурациях микроскопа;
- Запуск отдельного канала через TTL триггер в микросекундах;
- Съемные держатели встроенного фильтра возбуждения – без подвижных частей;
- Режим Sequence Runner - последовательное возбуждение от одного TTL-выхода;
- Выбор отдельного канала контролирует уровень возбуждения каждого красителя независимо от окрашенного образца;
- Совместимость с большинством программ для обработки изображений для интегрированного управления настройкой изображений;
- Точный контроль освещенности с шагом 1% (от 0 до 100%): фильтры нейтральной плостности не требуются;
- Подходит для существующих одно- и многополосных наборов оптических фильтров - не нужно покупать новые фильтры;
- Простой в установке, простой в использовании - без регулировки, однократная настройка;
- Широкий ассортимент адаптеров для микроскопов - подходит для большинства микроскопов.
Система светодиодного освещения 340 нм и 380 нм обеспечивает оптимальные длины волн возбуждения для получения изображений кальция на основе кальциевого индикатора Fura-2, обеспечивая высокоточное, стабильное и высокопроизводительное изображение с временным разрешением видеоряда.
Высокоскоростная визуализация
До недавнего времени время отклика систем освещения для визуализации красителя Fura-2 было ограничено миллисекундами из-за механического переключения длин волн в дуговых лампах и монохроматорных системах. Тем не менее, новым светодиодным осветителем CoolLED pE-340fura можно управлять через удобные соединения BNC с TTL триггером для точного управления освещением всего за 20 микросекунд.
Улучшенная жизнеспособность клеток и более низкая стоимость
Используя новую систему светодиодного освещения CoolLED pE-340fura, в клетки можно добавлять меньше красителя Fura-2, сохраняя при этом ту же измеренную концентрацию кальция и хорошее отношение сигнал/шум. Снижение объема необходимого красителя не только улучшает жизнеспособность клеток из-за снижения токсичности красителя, но также приводит к снижению затрат на проведение эксперимента.
Улучшенное отношение сигнал/шум
Работа Сандрин Прост и других исследователей из Эдинбургского университета показала, что при использовании независимых светодиодных источников с регулируемой длиной волны соотношение сигнал/шум значительно улучшается по сравнению с ламповыми системами освещения и даже с некоторыми доступными белыми источниками света широкого спектра.
Высокий уровень автофлуоресценции и быстрое фотообесцвечивание специфической флуоресценции при освещении Q-дотов галогенидом металла.2
Возбуждение 340 нм
|
Возбуждение 380 нм
|
Миоциты сердца. В клетки добавляли краситель Fura-2 с использованием стандартных условий (инкубация с 2 мМ ацетоксиметиловым эфиром Fura-2 в течение 30 минут с последующими дополнительными 30 минутами для деэтерификации). Изображения были получены Мартином Бутманом и Катей Ритдорф, Школа жизни, здравоохранения и химических наук, Открытый университет, Великобритания.
Спонтанные события Ca2+ индуцируются в HBS без Mg2+. (A) Репрезентативный след от одного нейрона гиппокампа без Ca2+-индуцированных событий, зарегистрированных при 0,5 Гц, и (B) репрезентативный след от двух нейронов гиппокампа без Ca2+-индуцированных событий, зарегистрированных при 24,39 Гц.1
Сравнение повышений Ca 2+, полученных при применении трипсина (100 нМ) к клеткам tsA-201, в которые добавлены различные концентрации Fura-2 AM.1
Ссылки:
1 TINNING, P. W., FRANSSEN, A. J. P.M., HRIDI, S. U., BUSHELL, T. J. and MCCONNELL, G. (2017), A 340/380 nm light-emitting diode illuminator for Fura-2 AM ratiometric Ca2+imaging of live cells with better than 5 nM precision. Journal of Microscopy. doi:10.1111/jmi.12616
2 Prost S et al (2016) Choice of Illumination System & Fluorophore for Multiplex Immunofluorescence on FFPE Tissue Sections. PLoS ONE 11(9): e0162419. doi:10.1371/journal.pone.0162419